抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：H0082
規(guī)格：50T/48S
注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體90mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入5mL 雙蒸水充分溶解；
試劑三：液體5mL×1 瓶，4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶之一。APX 具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質(zhì)、線粒體、過氧化物和乙醛酸體，以及過氧化體和類囊體膜上。APX 催化 H2O2 氧化 AsA，是植物 AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影響到 AsA 的含量，在脅迫和解脅迫條件下，APX 與 AsA 具有一定的負(fù)相關(guān)性。
APX 催化H2O2 氧化AsA，通過測(cè)定AsA 的氧化速率，可計(jì)算得APX 活力。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL 石英比色皿、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取 ：
按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。13000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測(cè)。
二、測(cè)定操作表：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到290nm，用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一在25℃中預(yù)熱30min以上。
3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL 蒸餾水、700μL預(yù)熱的試劑一、100μL試劑二和
100μL試劑三，迅速混勻后在290nm 測(cè)定10 s 和130 s 光吸收A1 和A2，△A 空白管=A1-A2。
4. 測(cè)定管：依次在 1mL 石英比色皿中加入100μL 上清液、700μL 預(yù)熱的試劑一、100μL 試劑二和
100μL 試劑三，迅速混勻后在 290nm 測(cè)定 10 s 和 130 s 光吸收 A3 和 A4，△A 測(cè)定管=A3-A4。三、APX 活力計(jì)算：
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol AsA 為1U。
APX(U/mg prot) = (△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷(ε×d）×V 反總×106÷(Cpr×V 樣)÷T
=1.79×(△A 測(cè)定管-△A 空白管) ÷ Cpr
ε：AsA 在 290nm 處摩爾吸光系數(shù)為 2.8×103L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積（L），1000μL=1×10-3 L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL）， 100μL=0.1 ml；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），2min。
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
單位的定義：每 g 組織每分鐘氧化 1μmol AsA 為 1U。
APX(U/g ) = (△A 測(cè)定管-△A 空白管)÷(ε×d）×V 反總×106÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T
=1.79×(△A 測(cè)定管-△A 空白管) ÷W
ε：AsA 在 290nm 處摩爾吸光系數(shù)為 2.8×103 L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積（L），1000μL=1×10-3 L；106：1mol=1×106μmol；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積
（mL），100μL=0.1 mL；V 樣總：加入試劑一體積，1mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），
2min。
原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司
標(biāo)簽：抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性檢測(cè)試劑盒 抗壞血酸過氧化物酶活性檢測(cè)試劑盒 抗壞血酸過氧化物酶測(cè)試盒 APX檢測(cè)試劑盒
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