植物蔗糖酶（sucrase）試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/48 樣
測(cè)定意義：
蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的關(guān)鍵酶之一，能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖而被機(jī)體吸收。
測(cè)定原理：
本試劑盒采用 3.5－二硝基水楊酸法測(cè)定蔗糖酶催化產(chǎn)生的還原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是 3.5－二硝基水楊酸與還原糖共熱被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比。此法操作簡(jiǎn)便、迅速、雜質(zhì)干擾較小。
所需的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、沸水浴、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存，用時(shí)每瓶加入 5mL 蒸餾水充分溶解，現(xiàn)配先用；試劑三：液體 5mL×1 瓶，常溫保存；
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
加樣表和測(cè)定步驟：
| 試劑名稱(chēng)（μL） | | 對(duì)照管 | | 測(cè)定管 |
| 試劑一 | | 50 | | 50 |
| 蒸餾水 | | 100 | | |
| 樣本 | | | | 100 |
| 試劑二 | | 50 | | 50 |
| | | 置于 25℃準(zhǔn)確水浴 10min | |
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| 試劑三 | 100 | | 100 |
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| 混勻， 100℃水浴 5min 左右（蓋緊，防止水分散失），冷卻至室溫 |
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| 蒸餾水 | 700 | | 700 |
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混勻，520nm 蒸餾水調(diào)零，測(cè)定各管吸光值，ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照，對(duì)照管只要做一管。
蔗糖酶活力計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 0.1296x -0.12；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。2、按照蛋白濃度計(jì)算單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。
蔗糖酶活力(μg/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。3、按樣本鮮重計(jì)算單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。
蔗糖酶活力(μg/g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12) ÷W。1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，
1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，10min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。
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