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細胞介導細胞毒試驗

點擊次數:1098 日期:2016/8/8 8:46:46

細胞介導細胞毒試驗
 
    細胞毒是細胞介導免疫的主要效應之一,是機體的一種免疫監督機制,因此,細胞毒試驗(包括NK,ADCC,LAK,TIL,CTL等)是一項重要的免疫指標。傳統的同位素示蹤、染料排斥、熒光法等都有同位素污染、人為因素影響等缺點。FCM法綜合了上述常規法的優點,越來越引起臨床醫學家的重視。
   碘化丙啶(Propidium  Iodide,PI)染料排斥法  利用PI可以滲透到死細胞內使核染色的特點,用FCM分析死亡靶細胞比例。此方法還有一個51Cr釋放法不能比擬的長處,即不但可以測定單次細胞毒試驗(SCCA),也可以觀察NK細胞的再循環殺傷作用,即:效應細胞殺死一個靶細胞后,可再殺傷其他細胞的能力,稱之總細胞毒試驗(TCCA)。
   FDA-FCM試驗   基本原理同PI排斥法,但它同前者相反,是以熒光染料FDA在活細胞內滯留,以計算活細胞數為基礎。FDA可以穿通活的細胞膜進入胞內,受胞內脂酶水解,產生熒光物質留于胞內;細胞受殺傷時,染料排出,以確定殺傷效應。
細胞光掃描法  通過靶細胞受效應細胞殺傷后發生形態的改變及光掃描特性變化,在排除效應細胞群體后,用特設的閾值把死活的兩群靶細胞分開,計算殺傷效應。
也有學者用雙標記細胞毒法,即用綠熒光色素標記效應細胞,用紅色熒光素標記靶細胞,在細胞裂解前,用FCM定量測定效應細胞和靶細胞的結合體形成。

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