食源性致病菌ELISA檢測

世界衛生組織將食源性疾病定義為“凡是通過攝氏而進入人體的病原體，使人體患感染性或中毒性疾病，統稱為食源性疾病”。導致這類疾病的微生物叫食源性致病菌。隨著人們居住和衛生條件的不斷改善，以及抗生素的康永，人類對病菌的抵抗能力卻在不斷下降，食源性疾病一直呈上升的趨勢。因此，對視頻中致病菌的檢測和檢驗也就越來越現實其重要性，常規的檢驗大多依靠培養目標微生物的方法來確定視頻是否收到此微生物的污染，這些方法需要一定的培養時間，少則2-3天，多至數周，才能確定。而現行有效的一些快速檢測方法不僅可以大大縮短檢測時間，提高微生物檢出率，做到快速、簡便、準確。免疫測定法，就因其準確性、特異性、使用范圍寬，檢測熟讀快及費用低的特點，成為檢驗中廣泛應用的方法之一。

沙門氏菌是引起食物中毒的中藥病原菌。在世界各國的各類細菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。在英國，就以沙門氏菌占首位，美國則為第二位僅次于金黃色葡萄球菌，日本則以溶血性弧菌和金黃色葡萄球菌為最多，沙門氏菌占第三位。我國內陸地區也是以沙門氏菌為首位，世界上最大的儀器沙門氏菌食物中毒是1953年瑞典由吃豬肉而引起的鼠傷寒沙門氏菌中毒，7717人中毒，90人死亡。

沙門氏菌廣泛分布于自然界中，而且種類多，至今已有2000種以上，的許晴型被發現。因此食物受到沙門氏菌污染的機會很多，易受污染的食品種類也很多，包括生畜、禽、蛋、奶、魚、蝦、貝類制品等。另外，在耨寫環境條件下豆制品、水、糕點、以及食品加工攝氏表面也可檢出，所以沙門氏菌日益引起人們的高度重視，視頻中的沙門氏菌的檢驗也顯得非常重要，沙門氏菌的檢測方法也是世界各國研究最多的，因此沙門氏菌的檢測方法相對于其他致病菌也是最多的。

ELISA試驗中應當注意以下事項：

用ELISA殘留物測定的視頻樣品十分廣泛，包括動物體液（如乳汁）、各種動物的肌肉組織和內臟組織以及常見各類食品等均可經過提取目標物如；農藥、獸藥、致病菌、病毒等的的抗體獲抗原成分進行檢測。有些標本可直接進行測定或使簡單的離心、稀釋（如；牛奶）,有些則需經過梨花方法提�。ㄈ纾粍游锝M織和內臟中的獸藥檢測。）檢測樣品應保證新鮮，經前處理的提取液應及時進行ELISA檢測，時間越長，提取液中的抗原的小家越低，如不能及時檢測，應放4℃冰箱保存。應盡量防止細菌污染，因菌體中可能有內源性HRP，可能導致假陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中的HRP可發生聚合，在間接法ELISA檢測中可使本底加深，所以標本如需保存做多次檢測，宜采用少量分裝冰箱保存，組織樣品若不及時做前期處理，應放-15℃冰箱保存。

嚴格按實際和說明書的要求準備試驗中需要的試劑。ELISA檢測中應采用蒸餾水或去離子水洗滌用水應新鮮和高質量。自配的緩沖液應用PH計測量校正。從冰箱取出的實驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次實驗不許用的部分及時放回冰箱保存。

在ELISA家養步驟中，應將所加物加在ELISA板孔的地步，避免加載孔壁尚不，病注意不可濺出，不可產生氣泡。加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中，每次加標本應跟換吸嘴，以免發生交叉污染，加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量掇刀加液器，使加液過程迅速完成。

在視頻檢測中，檢測物抗原因分子量較小，一般采用競爭法對抗員進行檢測。在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應，即家標本，抗體和加酶結合物后，ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面發生。以抗抗體包被為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并非都有均等的和固相抗體結合的機會，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸，這是一個逐步平衡的過程，需經擴散才能達到反應的終點。此乃ELISA反應總是需要一定時間溫育之原因。

溫育常采用的是43、37℃、室溫和4℃等。37℃是試驗中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法做反應動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時，產物的生成可達頂峰。為加速抗原抗體放映，可提高反應溫度，有些實驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度。實際上，抗原抗體反應在4℃條件下更為徹底，在放射免疫測定中多使抗原抗體反應在冰箱中過夜，已形成最多的沉淀。但因所需時間太長，在食品安全ELISA檢測中一般不予采用。

保溫的方式除有elisa儀器附有特制的電熱快外，一般采用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板應貼著睡眠，使溫度徐蘇平衡。為避免蒸發，班上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應放在濕盒中。