高效液相色譜法中流動相的選擇
在液相色譜中，可供選擇的流動相的范圍較寬，且還可組成多元溶劑系統與不同配比，在固定相確定后，流動相的種類、配比、ph值及添加劑等能顯著影響分離效果，因此HPLC中流動相的選擇至關重要。
（1）液-固吸附色譜的流動相：在液-固吸附色譜法中，流動相對分離的影響比較顯著，控制分離選擇性和分離速度主要靠選擇合適的流動相來實現。一般采用二元以上的混合溶劑系統，在低級性溶劑如烴類中，加入是兩極性溶劑如三氯甲烷、春蕾等以調節溶劑系統的極性。
（2）化學鍵合色譜的流動相：可采用固定比例（等度洗脫）或按規定程序改變比例（梯度洗脫）的溶劑組成作為流動相系統，在液-固吸附色譜法中，一般采用二元以上的混合溶劑系統，在低級性溶劑如烴類中，加入是兩極性溶劑如三氯甲烷、醇類等以調節溶劑系統的極性；在液-液分配色譜法中，流動相極性較小于固定相極性稱為正相色譜；流動相極性大于固定相極性稱為返現色譜。正相色譜用于分離極性及中等極性的分子型化合物；返現色譜用于分離非極性至中等極性的分子型化合物。在藥物分析中，反省色譜應用最廣。在反相色譜法中，由于固定相是非極性的，所以，流動相極性越弱，其洗脫能力越強。典型的反相色譜法是用非極性固定相，常用十八烷基鍵合相（ODS或C18),流動相用甲醇-水或乙腈-水。洗脫時，極性打的組分線流出色譜柱，極性小的組分后流出色譜柱。由于C18鍵在水相環境中不易保持伸展狀態，故對于反向色譜系統，流動相中有機溶劑的比例通常不低于5%。否則C18鍵的隨機卷曲將導致組分保留值變化，造成色譜系統不穩定。
反向鍵合相色譜的流動相常選用下列三種：1 部分含水溶劑；以水為基礎溶劑，在加入一定量可與水互溶的有機極性調節劑（如甲醇、乙腈、四氫呋喃），適用于分離中等極性、弱極性藥物、常用甲醇-水、乙腈-水系統。2 非水溶劑：用于分離疏水性物質，尤其在柱填料表面鍵合的十八烷基硅膠量較大時，固定相對疏水化合物有異常的保留能力，需要有機溶劑，可在乙腈或甲醇中加入二氯甲烷或四氫呋喃（稱非水反相色譜）。3緩沖溶液；適用于可溶于水病可解離的化合物，如蛋白質、多肽及弱酸、弱堿類成分。緩沖液及其PH值不同會影響組分的保留值，常用的緩沖液有三乙胺磷酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽溶液，選用的ph值應使用溶質盡可能成為非解離形式，使固定相有較大保留能力（反向離子抑制色譜）。
爭相鍵合相色譜的流動相通常采用飽和烷烴（如正乙烷）中加入異丙醚等極性較大的溶劑作為極性調節劑，通過調節劑的濃度來改變溶劑強度，常采用二元以上的混合溶劑系統，可用薄層色譜（TLC）探索合適的流動相。
返現離子對色譜的流動相為極性較強的水系統混合溶劑，最常用的是甲醇-水、乙腈水中加入0.003-0.01mol/L的離子對試劑，調節有機溶劑的比例使組分K值在適宜范圍。離子對試劑的性質和濃度、流動相的PH值及流動相中有機溶劑的性質和比例都會影響組分的保留值和分離的選擇性。
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