中国肥老太婆高清VIDEO,久久久久无码精品国产AV蜜桃1,亚 洲 视 频 高 清 无 码,亚洲不卡av不卡一区二区

捷世康生物是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的“新星”企業(yè),產(chǎn)品及代理品牌產(chǎn)品范圍涵蓋了分子生物學(xué)細胞生物學(xué)免疫學(xué)生物化學(xué)等生命科學(xué)相關(guān)領(lǐng)域及相關(guān)實驗室消耗品

品牌中心

熱賣產(chǎn)品

企業(yè)動態(tài)

動物、植物、微生物

點擊次數(shù):1044 日期:2017/10/16 10:24:20

                                             動物、植物、微生物

乙酰輔酶 A 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。是生物體能源物質(zhì)代謝過程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營養(yǎng)物質(zhì)通過乙酰輔酶 A 匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化,經(jīng)過這條通路徹底氧化生成二氧化碳和水,釋放能量用于 ATP 合成。此外,乙酰輔酶

 

是合成脂肪酸,酮體,膽固醇及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。

 

測定原理

 

蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和 NAD 生成草酰乙酸和 NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰輔酶 A 和草酰乙酸生成檸檬酸和輔酶 A。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應(yīng),乙酰輔酶 A 含量和 NADH 的生成速率成正比,340nm 下吸光值的上升速率反應(yīng)了乙酰輔酶 A 含量的高低。

 

需自備的儀器和用品

 

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制

 

試劑一:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。

 

試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 250μL 試劑五充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

 

試劑三:液體 10μL×1 支,4℃保存。臨用前加入 250μL 試劑五充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

 

試劑四:粉劑×1 瓶,-20℃保存。臨用前加入 22.5mL 試劑五充分溶解備用;用不完的試劑

 

分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

 

試劑五:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。

 

工作液的配制:臨用前請根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×0.92 m L),將試劑二、三和四按

 

照 1:1:90 的比例混合,或者直接把試劑二和試劑三加入到試劑四中混勻(可以測定 24 樣);加樣前置 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴鍋中預(yù)熱 30 min;現(xiàn)配現(xiàn)用;

 

乙酰輔酶 A 的提取

 

1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104 個):試劑一體積(mL)為 500~10001 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

 

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

APX 活性計算公式:

 

(1) 按樣本蛋白濃度計算

 

活性單位定義:每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol AsA  1 個酶活單位。

 

APX(μmol/min/mg prot) = A÷(ε×d×V 反總×106÷(Cpr×V )÷T

 

=1.79×A÷ Cpr

 

2)按樣本質(zhì)量計算

 

活性單位定義:每 g 組織每分鐘氧化 1μmol AsA  1 個酶活單位。 APX(μmol/min/g 鮮重 ) = A÷(ε×d×V 反總×106÷(W×V ÷V 樣總)÷T

 

=1.79×A ÷W

 

εAsA  290nm 處摩爾吸光系數(shù)為 2.8×103 L/mol/cmd:比色皿光徑(cm),1 cmV 反總:反應(yīng)體系總體積(L),1000μL=1×10-3 L1061mol=1×106μmolV 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積(mL),100μL=0.1 mLV 樣總:加入提取液體積,1mLCpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒;W:樣本質(zhì)量,gT:催化反應(yīng)時間(min),2min

 

注意事項:

 

配制好的試劑二 4℃保存,并且 3 天內(nèi)使用完。

掃一掃,關(guān)注手機網(wǎng)站!!!

收縮
請掃一掃!