普通瓊脂培養基配制

1、根據用量按比例一次稱取各種成分，牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂20-30g、蒸餾水1000ml。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水融化后倒入燒杯。蛋白胨易吸濕，稱量時要迅速。

2、在燒杯中加入少于所需的水量，加熱，逐一加入各成分，使其溶解，瓊脂在溶解煮沸后加入，融化過程需不斷攪拌。加熱時應注意火力，勿使培養基燒焦或溢出，榮好后，補充所需水分。

3、校正PH值的方法為：取3只與標準比色管(ph7.6)相同的空比色管，其中一管內放蒸餾水5ml，另外兩管各加入待測的肉湯培養基5ml，其中一管內加入02%酚紅指示劑0.25ml（滴定管），搖勻，按下圖所示排列，舉起比色架，對光觀察。若滴定管色條較淡或為黃色，即表示培養基偏酸性，需滴加0.1mol/L NaOH校正；若呈紅色，即表示偏堿性，應滴加0.1mol/L HCL校正；使之與標準色管色澤相同為止。通常未校正前的肉湯均呈酸性。記下用去的NaOH(或HCl)溶液量，由此計算出校正全量培養基時所需NaOH(或HCl)溶液量。

4、趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利于某些實驗結果的觀察，如無特殊要求時可省去此步驟。

5、按照實驗要求，可將配制的培養基分裝入試管內或三角瓶內。分裝時注意勿使培養基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。

①液體分裝 分裝高度以試管高度的1/4左右為宜，分裝三角瓶的量則根據需要而定，一般以不超過三角瓶溶劑的1/2為宜。

②固體分裝 分裝試管時其裝入量不超過試管高度的1/5，滅菌后制成斜面，斜面長度不超過管長的1/2.分裝三角瓶，不超過容量的1/2為宜。分裝培養皿，已覆蓋培養皿底部厚度2-3mm為宜。

③半固體分裝。裝入量以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。

6 分裝完畢后，在使館口或三角瓶口塞上棉花，以阻止外界微生物進入培養基而造成污染，病保證有良好的通氣性能。

7、包扎、滅菌 棉塞上包一層牛皮紙，扎緊，即可進行高壓蒸汽滅菌。

8、將滅菌的試管培養基管口端擱在玻璃棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度一下不超過試管總長度1/2為宜。

9、滅菌后的培養基放入37℃恒溫箱中培養24h，以檢驗滅菌效果，無污染方可使用。

將滅菌的普通瓊脂培養基加熱融化，待冷至50℃左右，加入無菌的托纖維綿羊血或家兔鮮血5%混合后，分裝滅菌試管后立即白城斜面或傾注于滅菌平皿（如果瓊脂溫度過高，鮮血加入后則成紫褐色；溫度過低，則鮮血加入后瓊脂易凝不易混合。注意，混合時切勿產生氣泡）。帶凝固后，置37℃培養24h，無菌檢驗合格后方可應用。

無菌血液時用無菌操作方法采集健康動物，通常是綿羊或家兔的血液，加到盛有5%滅菌枸緣酸鈉或3%滅菌肝素鈉的100ml三角瓶內，或加到盛有玻璃小珠的滅菌三角瓶內搖勻脫纖后置冰箱中代用。

肉渣湯（皰肉）培養基

于每只試管中加入2-3g牛肉渣及肉高湯5-6mL，液面蓋以一薄層石蠟油，經121.3℃20-30min滅菌后保存于冰箱中備用。詞培養基用于厭氧菌的培養，必須注意，在使用時，將肉渣培養基置于水浴鍋煮沸10min以驅除管內存留的氧氣。
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