馬兜鈴為馬兜鈴科植物北馬兜鈴或馬兜鈴的干燥成熟果實。馬兜鈴具清肺降氣、止咳平喘、清腸消痔之功效,臨床上用于肺熱喘咳、痰中帶血、腸熱痔血、痔瘡腫痛等癥。
馬兜鈴酸A為馬兜鈴的活性成分之一,也是其毒性成分之一,具有抗癌、抗感染及增強吞噬細胞活性等作用。本實驗采用高效液相色譜法,以315nm為檢測波長,測定馬兜鈴生品及蜜灸馬兜鈴中馬兜鈴酸A的含量,并以此為指標說明馬兜鈴炮制的作用和意義。
實驗材料
1、儀器
炒鍋、鍋鏟、液化氣、索氏提取器、分析天平、稱量紙、粉碎機、40目篩、水浴鍋,分液漏斗(50ml)2只、容量瓶(5ml)2只、量筒(100ml)、20ml各一只,高效液相色譜儀、YWG-C18色譜柱。
2、藥品
馬兜鈴藥材,蜜煉,馬兜鈴酸A對照品,乙醇(AR),甲醇(AR),水,乙酸(AR),丙酮(AR),甲酸(AR),氫氧化鉀(AR),乙醚(AR),硫酸(AR).
實驗內容
1、藥材的炮制
馬兜鈴生品:取馬兜鈴藥材,除去雜質,篩去灰屑,揉碎。
密馬兜鈴:取凈馬兜鈴,加入一式兩份開水稀釋的蜜煉,伴勻,悶透,置鍋中,用文火炒至不黏手。每100KG藥材用蜜煉25kg
含量測定
色譜條件 采用YWG-C18色譜柱(300*5mm),以甲醇-水-乙酸(70:29:1)為流動相:流速為1ml/min 紫外檢測波長為315nm
標準曲線的制備 精密吸取馬兜鈴酸A對照品乙醇溶液(0.2ug/ml)2/3/4/5/6ml,分別以乙醇定容為10ml,各樣品的濃度分別為0.04/0.06/0.08/0.1/0.12ug/ml,分別進樣5ul,以峰面積為縱坐標,進樣濃度(ug/ml)為橫坐標,的回歸方程。
樣品的制備 精密稱取馬兜鈴生品及蜜灸馬兜鈴藥材粉末(40目)1.5g于兩種150ml索氏提取器中,分別加含10%甲酸的丙酮150ml,在85℃水浴中回流提取5h。提取液回收至干,用0.5%NaOH液15ml使其完全轉移至分液漏斗中,調PH=2,用乙醚萃取4此,每次15ml,合并萃取液,水浴上蒸干,用乙醇定容于5ml容量瓶中,得供試液。
樣品的測定 取兩種供試液5ul,分別進樣,測定樣品濃度(ug/ml),并計算含量。
含量%=C*5/(W*10六次方)*100%
注 C為所測得 的樣品濃度(ug/ml)
W為取樣量(g)
原創作者:青島捷世康生物科技有限公司