在elisa試劑盒實驗中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本物和加結(jié)合物后，此時反應(yīng)的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定的要求，保溫容器最好是水浴箱，可使elisa試劑盒實驗中的溫度保持平衡。elisa試劑盒實驗中各elisa板不應(yīng)該疊在一起。為了避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或者將板平放在底部墊有濕紗布的濕盒中，濕盒應(yīng)該是金屬的，傳熱容易。

ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒實驗反應(yīng)總是需要一定時間的溫育。

elisa試劑盒實驗中溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是elisa試劑盒實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)物的生成可達頂峰。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度，有些elisa試劑盒試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃更為徹底，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜，以形成最多的沉淀。但因所需時間太長，在ELISA試劑盒實驗中一般不予采用。

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